Home Cell Cycle Aurora Kinase Hämmare Hesperadin

endast för forskning

Hesperadin Aurora B-hämmare

Kat.nr.: S1529

Hesperadin hämmar potent Aurora B med ett IC50 på 250 nM i en cellfri analys. Den minskar markant aktiviteten av AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1 och PHK medan den inte hämmar MKK1-aktiviteten in vivo.
Hesperadin Aurora Kinase Hämmare Chemical Structure

Kemisk struktur

Molekylvikt: 516.65

Hoppa till

Kvalitetskontroll (Quality Control)

Batch: Renhet: 99.09%
99.09

Cellodling, behandling & arbetskoncentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellinjer Analystyp Koncentration Inkubationstid Formulering Aktivitetsbeskrivning PMID
HepG2 cells Cytotoxicity assay 48 h Cytotoxicity against human HepG2 cells after 48 hrs by MTT assay, TC50=0.2 μM
Klicka för att visa mer experimentella data för cellinjer

Kemisk information, lagring & stabilitet (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekylvikt 516.65 Formel

C29H32N4O3S

 Lagring (från mottagningsdatumet)
CAS-nr 422513-13-1 Ladda ner SDF Lagring av stamlösningar

Synonymer N/A Smiles CCS(=O)(=O)NC1=CC2=C(C=C1)NC(=C2C(=NC3=CC=C(C=C3)CN4CCCCC4)C5=CC=CC=C5)O

Löslighet (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (193.55 mM)
(Fuktkontaminerad DMSO kan minska lösligheten. Använd färk, vattenfri DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molaritetsräknare

Massa Koncentration Volym Molekylvikt
Utspädningsräknare Molekylviktsräknare

In vivo
Batch:

In vivo-formuleringsräknare (Klar lösning)

Steg 1: Ange information nedan (Rekommenderas: Ett extra djur för att ta hänsyn till förluster under experimentet)

mg/kg g μL

Steg 2: Ange in vivo-formuleringen (Detta är endast räknaren, inte formuleringen. Vänligen kontakta oss först om det inte finns någon in vivo-formulering i löslighetsavsnittet.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Beräkningsresultat:

Arbetskoncentration: mg/ml;

Metod för att bereda DMSO-stamlösning: mg substans förlöst i μL DMSO ( Stamlösningskoncentration mg/mL, Vänligen kontakta oss först om koncentrationen överskrider DMSO-lösligheten för denna batch av substansen. )

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedanμL PEG300, blanda och klarna, tillsätt sedanμL Tween 80, blanda och klarna, tillsätt sedan μL ddH2O, blanda och klarna.

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedan μL Majsolja, blanda och klarna.

Obs: 1. Se till att vätskan är klar innan du tillsätter nästa lösningsmedel.
2. Se till att tillsätta lösningsmedlet/lösningsmedlen i ordning. Du måste se till att lösningen som erhålls i föregående tillsats är en klar lösning innan du fortsätter att tillsätta nästa lösningsmedel. Fysiska metoder som vortex, ultraljud eller varmt vattenbad kan användas för att underlätta upplösningen.

Verkningsmekanism (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
TbAUK1
(Cell-free assay)
40 nM
Aurora B (human)
(Cell-free assay)
250 nM
In vitro
Hesperadin inhibits the ability of immunoprecipitated Aurora B to phosphorylate histone H3 with IC50 of 250 nM and markedly reduces the activity of other kinases (AMPK, Lck, MKK1, MAPKAP-K1, CHK1, and PHK) at a concentration of 1 μM. In contrast, only 20-100 nM of this compound is sufficient to induce the loss of mitotic histone H3-Ser10 phosphorylation in HeLa cells. Its treatment causes defects in mitosis and cytokinesis, leading to stoppage of proliferation of HeLa cells and polyploidization, which can be specifically ascribed to the inhibition of Aurora B function during the process of chromosome attachment. This compound (100 nM) quickly overrides the mitotic arrest induced by taxol or monastrol but not by nocodazole. It and nocodazole treatment in HeLa cells abolishes kinetochore localization of BubR1 and diminishes the intensity of Bub1 at kinetochores, suggesting that Aurora B function is required for efficient kinetochore recruitment of BubR1 and Bub1, which in turn might be necessary for prolonged checkpoint signaling. It prevents the phosphorylation of recombinant trypanosome histone H3 by the T. brucei Aurora kinase-1 (TbAUK1) from pathogenic Trypanosoma brucei with IC50 of 40 nM in vitro kinase assays. This chemical significantly inhibits cell growth of cultured infectious bloodstream forms (BF) with IC50 of 48 nM, and only weakly inhibits cell growth of insect stage procyclic forms (PF) with IC50 of 550 nM.
Kinasanalys
Aurora B kinasanalysen
För Aurora B kinasanalysen lyseras HeLa-celler i en buffert innehållande 50 mM NaCl. Hela cellen extrakt centrifugeras vid 13 000 rpm i 20 minuter vid 4 °C med en bords centrifug. Pellets som erhållits från 200 mg hela cellextrakt extraheras igen i 15 mL lyseringsbuffert innehållande 250 mM NaCl för att erhålla aktiv Aurora B-kinas från mitotiskt kromatin. Den låghastighets supernaten från det senare extraktet används för immunprecipitering. Monoklonal mus anti–AIM-1, eller mus anti-HA, kopplas till GammaBind Plus Sepharose, och kulor roteras överänd i extraktet i 90 minuter vid 4 °C. Kulor tvättas, alikvoteras och tvättas i kinasbuffert (20 mM Tris, pH 7,5, 150 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 1 mM DTT, 10 mM NaF). Kinasanalysen utförs med 10 μL kulor i 20 μL kinasbuffert innehållande 5 μg histon H3, 10 μM ATP, 2,5 μCi [γ-32P]ATP, och olika koncentrationer av denna förening i 20 minuter vid 37 °C. SDS-provbuffert tillsätts, och prover kokas och separeras med SDS-PAGE. Gelen torkas, och den radioaktiva signalen detekteras med PhosphorImager-analys. Data analyseras med ImageQuant-programvara.
Referenser

Applikationer (Applications)

Metoder Biomarkörer Bilder PMID
Western blot trypanosome histone H3
S1529-WB1
19320832