Home Immunology & Inflammation SPHK Hämmare Opaganib (ABC294640)

endast för forskning

Opaganib (ABC294640) SphK2 Inhibitor

Kat.nr.: S7174

Opaganib (ABC294640) är en oralt biotillgänglig och selektiv sfingosinkinas-2 (SphK2)-hämmare med en IC50 på cirka 60 μM. Fas 1/2.
Opaganib (ABC294640) SPHK Hämmare Chemical Structure

Kemisk struktur

Molekylvikt: 380.91

Hoppa till

Kvalitetskontroll (Quality Control)

Batch: Renhet: 99.73%
99.73

Cellodling, behandling & arbetskoncentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellinjer Analystyp Koncentration Inkubationstid Formulering Aktivitetsbeskrivning PMID
Sf9 Function assay Inhibition of human recombinant SphK2 expressed in Sf9 cells assessed as radiolabeled products using 10 uM sphingosine and 10 uM gamma[32P]ATP by liquid scintillation counting, Ki=9.8μM 25643074
Sf9 Function assay 2 hrs Inhibition of recombinant human full-length N-terminal His-tagged SK2 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells using NBD-Sph as substrate measured after 2 hrs by fluorescence based HPLC analysis, Ki=9.8μM 30889352
Klicka för att visa mer experimentella data för cellinjer

Kemisk information, lagring & stabilitet (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekylvikt 380.91 Formel

C23H25ClN2O

 Lagring (från mottagningsdatumet)
CAS-nr 915385-81-8 Ladda ner SDF Lagring av stamlösningar

Synonymer N/A Smiles C1C2CC3(CC1CC(C2)(C3)C(=O)NCC4=CC=NC=C4)C5=CC=C(C=C5)Cl

Löslighet (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 76 mg/mL (199.52 mM)
(Fuktkontaminerad DMSO kan minska lösligheten. Använd färk, vattenfri DMSO.)

Ethanol : 28 mg/mL

Water : Insoluble

Molaritetsräknare

Massa Koncentration Volym Molekylvikt
Utspädningsräknare Molekylviktsräknare

In vivo
Batch:

In vivo-formuleringsräknare (Klar lösning)

Steg 1: Ange information nedan (Rekommenderas: Ett extra djur för att ta hänsyn till förluster under experimentet)

mg/kg g μL

Steg 2: Ange in vivo-formuleringen (Detta är endast räknaren, inte formuleringen. Vänligen kontakta oss först om det inte finns någon in vivo-formulering i löslighetsavsnittet.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Beräkningsresultat:

Arbetskoncentration: mg/ml;

Metod för att bereda DMSO-stamlösning: mg substans förlöst i μL DMSO ( Stamlösningskoncentration mg/mL, Vänligen kontakta oss först om koncentrationen överskrider DMSO-lösligheten för denna batch av substansen. )

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedanμL PEG300, blanda och klarna, tillsätt sedanμL Tween 80, blanda och klarna, tillsätt sedan μL ddH2O, blanda och klarna.

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedan μL Majsolja, blanda och klarna.

Obs: 1. Se till att vätskan är klar innan du tillsätter nästa lösningsmedel.
2. Se till att tillsätta lösningsmedlet/lösningsmedlen i ordning. Du måste se till att lösningen som erhålls i föregående tillsats är en klar lösning innan du fortsätter att tillsätta nästa lösningsmedel. Fysiska metoder som vortex, ultraljud eller varmt vattenbad kan användas för att underlätta upplösningen.

Verkningsmekanism (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
SphK2
(Cell-free assay)
60 μM
In vitro
Opaganib (ABC294640) markedly alters the ratio of ceramide/S1P consistent with inhibition of SK activity in MDA-MB-231 cells. It inhibits tumor cell proliferation with IC50 values ranging from approximately 6 to 48 μM, and impairs tumor cell migration concomitant with loss of microfilaments. This compound induces nonapoptotic cell death, morphological changes in lysosomes, formation of autophagosomes, and increases in acidic vesicles in A-498, PC-3, and MDA-MB-231 cells. In both MCF-7 and ER-transfected HEK293 cells, it decreases E2-stimulated ERE-luciferase activity.
Kinasanalys
Sphingosine Kinase Assays
IC50-värdena för Opaganib (ABC294640) och DMS bestäms med en nyutvecklad HPLC-baserad SK-aktivitetsanalys. Kortfattat inkuberas testföreningarna med rekombinant SK1 eller SK2 och NBD-Sph i de isozymselektiva analysbuffertarna som beskrivs nedan med 1 mg/ml fettsyrafritt bovint serumalbumin, 100 μM ATP och 400 μM MgCl2. Produkten, dvs. NBD-S1P, separeras från NBD-Sph med HPLC på följande sätt: Waters 2795 HPLC-system med en Waters 2495 fluorescensdetektor, C8 Chromolith RP-8e-kolonn (100 × 4.6 mm), 1 ml/min mobilfas (acetonitril/20 mM natriumfosfatbuffert, pH 2.5, vid 45:55). Fluorescensen övervakas med excitation vid 465 nm och emission vid 531 nm. Förhållandet NBD-S1P/(NBD-Sph + NBD-S1P) används som ett mått på SK-aktivitet. SK-isozymselektiva analysbuffertar innehöll vardera 20 mM Tris, pH 7.4, 5 mM EDTA, 5 mM EGTA, 3 mM β-merkaptoetanol, 5% glycerol, 1× proteasinhibitorer och 1× fosfatasinhibitorer. För SK1-analysbufferten tillsätts 0.25% (slutlig) Triton X-100; och för SK2-bufferten tillsätts 1 M (slutlig) KCl. Analyserna körs i 2 timmar vid rumstemperatur, och sedan tillsätts 1.5 volym metanol för att avsluta kinasreaktionen. Efter 10 minuter centrifugeras proverna vid 20 000g för att pelletera det utfällda proteinet, och supernatanten analyseras med HPLC. I experiment för att bestämma Ki för hämning av SK2 av denna förening används ADP Quest-analyssystemet för att mäta kinasaktivitet i närvaro av varierande koncentrationer av sfingosin och det. För att bestämma effekterna av Opaganib på cellulär SK-aktivitet serum-svältes nästan konfluenta MDA-MB-231-celler över natten, och behandlades sedan med varierande koncentrationer av det. Cellerna inkuberades sedan med [3H]sfingosin vid en slutlig koncentration av 1 μM. Cellerna tar upp det exogena sfingosinet, som omvandlas till S1P via SK-aktivitet, och [3H]S1P separeras från [3H]sfingosin genom extraktion och kvantifieras genom scintillationsräkning.
In vivo
Opaganib (ABC294640) significantly reduces tumor growth in mice bearing mammary adenocarcinoma xenografts, associated with depletion of S1P levels. In severe combined immunodeficient mice bearing A-498 xenografts, it delays tumor growth and elevates autophagy markers. This compound also protects against liver transplantation-induced inflammation and cross-talk between innate and adaptive immunities, major events precipitating and exacerbating graft injury, and improves liver function and survival.
Referenser
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22848628/

Applikationer (Applications)

Metoder Biomarkörer Bilder PMID
Western blot c-Myc pRb / Rb H3K9ac / p21 p-STAT3 / STAT3
S7174-WB1
27517489
Growth inhibition assay Cell proliferation
S7174-viability1
25122609

Klinisk prövningsinformation (Clinical Trial Information)

(data från https://clinicaltrials.gov, uppdaterad den 2024-05-22)

NCT-nummer Rekrytering Tillstånd Sponsor/Samarbetspartners Startdatum Faser
NCT02939807 Withdrawn
Carcinoma Hepatocellular
Medical University of South Carolina|National Cancer Institute (NCI)|Apogee Biotechnology Corporation
 September 30 2019 Phase 2
NCT03377179 Completed
Cholangiocarcinoma|Cholangiocarcinoma Non-resectable|Cholangiocarcinoma Perihilar|Cholangiocarcinoma Extrahepatic|Cholangiocarcinoma Intrahepatic
RedHill Biopharma Limited
 March 7 2018 Phase 2
NCT02757326 Terminated
Multiple Myeloma
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Duke University|National Cancer Institute (NCI)
 December 13 2016 Phase 1|Phase 2
NCT02229981 Withdrawn
Diffuse Large B Cell Lymphoma|Kaposi Sarcoma
RedHill Biopharma Limited|Louisiana State University Health Sciences Center in New Orleans|Apogee Biotechnology Corporation
 July 2014 Phase 1|Phase 2
NCT01488513 Completed
Pancreatic Cancer|Unspecified Adult Solid Tumor Protocol Specific
RedHill Biopharma Limited|Apogee Biotechnology Corporation|Medical University of South Carolina|FDA Office of Orphan Products Development|National Cancer Institute (NCI)
 August 2011 Phase 1