Home Immunology & Inflammation ROS Aktivator Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate

endast för forskning

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS aktivator

Kat.nr.: S7873

Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate (D-α-hydroxiglutarsyra-dinatriumsalt) är en kompetitiv hämmare av α-ketoglutaratberoende dioxygenaser med ett Ki-värde på 10,87 ± 1,85 mM.
Disodium (R)-2-Hydroxyglutarate ROS Aktivator Chemical Structure

Kemisk struktur

Molekylvikt: 192.08

Hoppa till

Kvalitetskontroll (Quality Control)

Batch: Renhet: 99.74%
99.74

Kemisk information, lagring & stabilitet (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekylvikt 192.08 Formel

C5H6Na2O5

 Lagring (från mottagningsdatumet)
CAS-nr 103404-90-6 Ladda ner SDF Lagring av stamlösningar

Synonymer D-α-Hydroxyglutaric acid disodium Smiles C(CC(=O)[O-])C(C(=O)[O-])O.[Na+].[Na+]

Löslighet (Solubility)

In vitro
Batch:

Water : 38 mg/mL

DMSO : Insoluble
(Fuktkontaminerad DMSO kan minska lösligheten. Använd färk, vattenfri DMSO.)

Ethanol : Insoluble

Molaritetsräknare

Massa Koncentration Volym Molekylvikt
Utspädningsräknare Molekylviktsräknare

In vivo
Batch:

In vivo-formuleringsräknare (Klar lösning)

Steg 1: Ange information nedan (Rekommenderas: Ett extra djur för att ta hänsyn till förluster under experimentet)

mg/kg g μL

Steg 2: Ange in vivo-formuleringen (Detta är endast räknaren, inte formuleringen. Vänligen kontakta oss först om det inte finns någon in vivo-formulering i löslighetsavsnittet.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Beräkningsresultat:

Arbetskoncentration: mg/ml;

Metod för att bereda DMSO-stamlösning: mg substans förlöst i μL DMSO ( Stamlösningskoncentration mg/mL, Vänligen kontakta oss först om koncentrationen överskrider DMSO-lösligheten för denna batch av substansen. )

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedanμL PEG300, blanda och klarna, tillsätt sedanμL Tween 80, blanda och klarna, tillsätt sedan μL ddH2O, blanda och klarna.

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedan μL Majsolja, blanda och klarna.

Obs: 1. Se till att vätskan är klar innan du tillsätter nästa lösningsmedel.
2. Se till att tillsätta lösningsmedlet/lösningsmedlen i ordning. Du måste se till att lösningen som erhålls i föregående tillsats är en klar lösning innan du fortsätter att tillsätta nästa lösningsmedel. Fysiska metoder som vortex, ultraljud eller varmt vattenbad kan användas för att underlätta upplösningen.

Verkningsmekanism (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
α-ketoglutarate-dependent dioxygenase
In vitro
In U-87MG cells, (R)-2-Hydroxyglutarate acts as weak antagonists of α-KG to inhibit α-KG-dependent histone demethylases and increases dimethylation on both H3K9 and H3K79. Besides, (R)-2-Hydroxyglutarate inhibits ATP synthase and mTOR signaling, and thus causes growth arrest and tumor cell killing.
Kinasanalys
Enzymatiska analyser
För att analysera human JHDM1A/KDM2A-demetylasaktivitet mot H3K36me2 erhålls först His-taggat JHDM1A genom transformering av pET28a-JHDM1A i Escherichia coli BL21, och proteinuttrycket induceras genom tillsats av 1 mM IPTG vid 30 °C när celldensiteten når 0,5 OD600-enheter. Celler lyseras genom sonikering och Ni-NTA-agaros används för att rena His-JHDM1A-fusionsproteiner. Histondemetylasanalys utförs genom inkubering av 2 μg oligonukleosomer, 4 μg renat His-JHDM1A och/eller 10–50 mM L- eller D-2-HG i histondemetyleringsbuffert [50 mM HEPES (pH 8,0), 625 μM Fe(NH4)2(SO4)2, 0,1–0,5 mM α-KG, 2 mM askorbat] vid 37 °C i 2–3 timmar. Reaktionerna avbryts genom tillsats av SDS-laddningsbuffert och analyseras därefter genom western blotting med användning av anti-H3K36me2-antikropp. För att mäta CeKDM7A-demetylasaktivitet mot H3K9me2 och H3K27me2 används två syntetiska dimetylerade peptider H3K9me2 [ARTKQTARK (me2)STGGKA] och H3K27me2 [QLATKAARK (me2)SAPAS] som substrat. Demetylasanalyser utförs i närvaro av 10 μg enzym, 1 μg peptid i 20 μl buffert 20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 50 μM Fe(NH4)2(SO4)22, 100 μM α-KG, 2 mM Vc, 10 mM PMSF under 3 timmar. Demetyleringsreaktionsblandningen avsaltas genom passage genom en C18 ZipTip. För att undersöka den hämmande effekten av 2-HG inkuberas olika koncentrationer av 2-HG kort med KDM7A innan andra reaktionsblandningar tillsätts. Proverna analyseras med en MALDI-TOF/TOF-masspektrometer.
Referenser