Home MAPK JNK Hämmare JNK-IN-8

endast för forskning

JNK-IN-8 JNK Hämmare

Kat.nr.: S4901

JNK-IN-8 (JNK Inhibitor XVI) är den första irreversibla JNK-hämmaren för JNK1, JNK2 och JNK3 med ett IC50-värde på 4,7 nM, 18,7 nM och 1 nM, >10-faldig selektivitet mot MNK2, Fms och ingen hämning av c-Kit, Met, PDGFRβ i A375-cellinjen.
JNK-IN-8 JNK Hämmare Chemical Structure

Kemisk struktur

Molekylvikt: 507.59

Hoppa till

Kvalitetskontroll (Quality Control)

Batch: Renhet: 99.16%
99.16

Cellodling, behandling & arbetskoncentration
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellinjer Analystyp Koncentration Inkubationstid Formulering Aktivitetsbeskrivning PMID
human HeLa cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human HeLa cells after 1 hr incubation, IC50=0.486 μM 25415535
human A375 cells Function assay 1 h Inhibition of JNK3-mediated c-jun phosphorylation in human A375 cells after 1 hr incubation, IC50=0.338 μM 25415535
Klicka för att visa mer experimentella data för cellinjer

Kemisk information, lagring & stabilitet (Chemical Information, Storage & Stability)

Molekylvikt 507.59 Formel

C29H29N7O2

 Lagring (från mottagningsdatumet)
CAS-nr 1410880-22-6 Ladda ner SDF Lagring av stamlösningar

Synonymer JNK Inhibitor XVI Smiles CC1=C(C=CC(=C1)NC(=O)C2=CC(=CC=C2)NC(=O)C=CCN(C)C)NC3=NC=CC(=N3)C4=CN=CC=C4

Löslighet (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (197.0 mM)
(Fuktkontaminerad DMSO kan minska lösligheten. Använd färk, vattenfri DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molaritetsräknare

Massa Koncentration Volym Molekylvikt
Utspädningsräknare Molekylviktsräknare

In vivo
Batch:

In vivo-formuleringsräknare (Klar lösning)

Steg 1: Ange information nedan (Rekommenderas: Ett extra djur för att ta hänsyn till förluster under experimentet)

mg/kg g μL

Steg 2: Ange in vivo-formuleringen (Detta är endast räknaren, inte formuleringen. Vänligen kontakta oss först om det inte finns någon in vivo-formulering i löslighetsavsnittet.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Beräkningsresultat:

Arbetskoncentration: mg/ml;

Metod för att bereda DMSO-stamlösning: mg substans förlöst i μL DMSO ( Stamlösningskoncentration mg/mL, Vänligen kontakta oss först om koncentrationen överskrider DMSO-lösligheten för denna batch av substansen. )

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedanμL PEG300, blanda och klarna, tillsätt sedanμL Tween 80, blanda och klarna, tillsätt sedan μL ddH2O, blanda och klarna.

Metod för att bereda in vivo-formulering: Ta μL DMSO stamlösning, tillsätt sedan μL Majsolja, blanda och klarna.

Obs: 1. Se till att vätskan är klar innan du tillsätter nästa lösningsmedel.
2. Se till att tillsätta lösningsmedlet/lösningsmedlen i ordning. Du måste se till att lösningen som erhålls i föregående tillsats är en klar lösning innan du fortsätter att tillsätta nästa lösningsmedel. Fysiska metoder som vortex, ultraljud eller varmt vattenbad kan användas för att underlätta upplösningen.

Verkningsmekanism (Mechanism of Action)

Egenskaper
JNK-IN-8 and JNK-IN-7 are structurally very similar, but whereas the former is a specific covalent inhibitor of JNKs.
Targets/IC50/Ki
JNK3
(A375 cells)
1 nM
JNK1
(A375 cells)
4.7 nM
JNK2
(A375 cells)
18.7 nM
Kit (V559D,T670I)
(A375 cells)
56 nM
Kit (V559D)
(A375 cells)
92 nM
In vitro

JNK-IN-8 inhibits c-Jun phosphorylation in HeLa and A375 cells with EC50 of 486 nM and 338 nM, respectively. This compound shows a dramatic improvement in selectivity and eliminated binding to IRAK1, PIK3C3, PIP4K2C, and PIP5K3. It requires Cys116 for JNK2 inhibition.

This chemical (10 mM) suppresses the IL-1β-stimulated phosphorylation of c-Jun in IL-1R cells, an established substrate of the JNKs. It covalently attaches to the JNK isoforms caused a small retardation in the electrophoretic mobility of the JNK isoforms.

It is discovered to inhibit JNK kinase by broad-based kinase selectivity profiling of a library of acrylamide kinase inhibitors based on the structure of using the KinomeScan approach. This compound possesses distinct regiochemistry of the 1,4-dianiline and 1,3-aminobenzoic acid substructures. It adopts an L-shaped type I binding conformation to access Cys 154 located toward the lip of the ATP-binding site.

Kinasanalys
Analys av bindningskinetik
För bindningskinetikanalys förbehandlas A375-celler med 1 μM JNK-IN-8 under de angivna tidsperioderna. Avlägsna mediet och tvätta tre gånger med PBS. Resuspendera cellpelleten med 1 mL lysbuffert (1% NP-40, 1% CHAPS, 25 mM Tris, 150 mM NaCl, Phosphatase Inhibitor Cocktail och Protease Inhibitor Cocktail). Rotera ända till ända i 30 min vid 4℃. Lysat klaras genom centrifugering vid 1,4×104 rpm i 15 min i en Eppendorf. De klarade lysaten gelfiltreras in i Kinase Buffer (0,1% NP-40, 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, Phosphatase Inhibitor Cocktail, Protease Inhibitor Cocktail) med användning av 10DG-kolonner. Den totala proteinkoncentrationen i det gelfiltrerade lysatet bör vara cirka 5–15 mg/ml. Celllysat märks med proben från ActivX vid 5 μM i 1 timme. Prover reduceras med DTT, och cysteiner blockeras med jodacetamid och gelfiltreras för att avlägsna överskottsreagenser och byta buffert. Tillsätt 1 volym 2× Binding Buffer (2% Triton-100, 1% NP-40, 2 mM EDTA, 2× PBS) och 50 μL streptavidin-bead-slurry, och rotera ända till ända i 2 timmar, centrifugera vid 7 000 rpm i 2 min. Tvätta tre gånger med 1× Binding Buffer och tre gånger med PBS. Tillsätt 30 μL 1× provbuffert till beadsen; värm proverna vid 95℃ i 10 min. Kör proverna på en SDS-PAGE-gel vid 110V. Efter överföring immunoblottas membranet med JNK-antikropp.
In vivo

JNK-IN-8 is a potent JNK inhibitor that specially targets JNK activation. It has anti-fungal activity.
Referenser
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/28112734/

Applikationer (Applications)

Metoder Biomarkörer Bilder PMID
Western blot c-Jun / p-c-Jun / ATF2 / p-ATF2 / Elk-1 / pElk-1 Notch1 / c-Myc / Cyclin D1 / p21
S4901-WB1
27941886
Growth inhibition assay Cell viability
S4901-viability1
25847947